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亞硒酸鹽增菌培養基的原理及使用注意事項

許英俊
錄入時間:2018-3-20 14:51:39 來源:青島海博生物

一、試驗原理:

本培養基主要用于增殖標本中的沙門氏菌。其中,胰蛋白胨提供碳源和氮源,滿足細菌生長的需求;乳糖是可發酵的糖類;亞硒酸氫鈉對革蘭氏陰性桿菌具有毒性,抑制不發酵乳糖的革蘭氏陽性菌和非沙門氏菌的大多數革蘭氏陰性腸道菌;但大腸桿菌等細菌能使乳糖發酵產酸,進而中和因亞硒酸鹽被細菌還原而產生的堿。磷酸鹽是緩沖劑,保持培養基PH穩定,有利腸道致病菌的生長繁殖。

二、試驗結果判斷:

質控菌株接種后于36±1℃培養18-24h結果如下:  

 菌 名

 菌 號

 生長狀況

 培養特征

 鼠傷寒沙門氏菌

 ATCC14028

 良好

 變紅,混濁

 大腸埃希氏菌

 ATCC25922

 受抑制

 澄清或微混濁

糞腸球菌

 ATCC29212

受抑制

澄清或微混濁

 

 

不同菌種在亞硒酸鹽增菌液中培養的結果

三、使用方法:

1)按說明書稱取適量干粉,加熱溶解于1000ml蒸餾水中分裝無菌試管或三角瓶備用。注無需高壓滅菌。

2)污水:取200ml污水,用滅菌濾膜進行抽濾。用100ml二倍濃度SF增菌液把濾膜上截留的雜質洗脫到滅菌三角瓶內,充分搖勻。

污泥:用滅菌匙取污泥20g,放入滅菌容器內,加入200ml滅菌水,充分混勻,制成110混懸液,搖勻。加100ml至裝有100ml二倍濃度SF增菌液的已滅菌的三角瓶內,搖勻。

3)將已接種的三角瓶放入恒溫培養箱中,36±1℃培養1824h

四、注意事項:

1)亞硒酸鹽具有致畸毒性,使用時應特別注意。

2)此培養基不得高壓滅菌,也不得用較長時間的流通蒸汽滅菌或較長時間的煮沸滅菌。制成的培養基應貯存于4℃冰箱。

3)此培養基中的蛋白胨品種很重要,因此無論國產或國外蛋白胨在使用前必須先作細菌學檢測。國產蛋白胨必須做到每批檢測。

4Oxiod手冊還介紹用甘露醇代替乳糖,用于分離傷寒沙門氏菌及乙型副傷寒沙門氏菌。Hobbs等比較含乳糖和含甘露醇兩組亞硒酸鹽增菌培養基,在38份傷寒陽性糞便中,由含甘露醇組分離出32例陽性,而含乳糖組只有5例陽性,顯示甘露醇對分離傷寒沙門氏菌有高度選擇性。

5糞便標本接種量約占培養基體積的1%,或將含有糞便的棉拭子插入培養基中,尿液標本可等量加入雙倍濃度增菌液中。增菌時間應根據標本污染情況而定,污染嚴重的增菌在18小時以內,反之可適當延長增菌時間,但不得超過24h,即轉種于選擇性分離培養基。因延長增菌時間可使大腸菌群迅速生長繁殖,影響沙門氏菌檢出。

 

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